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抗酸化能の測定に

H-ORAC測定用キット

H-ORAC Activity Assay Kit

食品から摂取した抗酸化物質が活性酸素種を消去し、生体成分の酸化反応を防ぎ、健康の維持・増進に寄与することが期待されています。Oxygen Radical Absorbance Capacity(以下ORAC)法は広く食品の抗酸化能評価に使用されている手法であり、特に親水成分の抗酸化能を測定する為の手法として、H-ORAC法があります1)

本製品は、国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構により妥当性の確認された測定方法として確立された標準化法2)による測定と同等の性能をもつことを確認しています。食品成分の抗酸化能評価にぜひご活用下さい。

【総説】妥当性の確認されたORAC(酸素ラジカル吸収能)法による食品の抗酸化能評価(和光純薬時報 Vol.85 No.2, April 2017)

【参考文献】
1) 渡辺純・他 : 日本食品科学工学会誌, 57: 525-531(2010)
2) Watanabe, J. et al. : Anal. Sci., 28: 159-165(2012)

特長

  • 標準作業手順書による測定と同等の評価が可能
  • 緩衝液等の調製が簡便

プロトコル

H-ORAC-01.png

測定手順

本キットを用いた測定では、始めに「ORAC予測値の算出」を行い、測定サンプルの最適な希釈倍率を決定します。次に「ORAC予測値の算出」から得られた希釈倍率のサンプルを用いて「ORAC値の算出」(本試験)を行います。

【参考情報】
「食品研究等データベース」の食品機能評価マニュアルより「食品の抗酸化能値測定法(H-ORAC分析法)」にて解析処理用のエクセルシートが掲載されています。

H-ORAC-02.png

ORAC予測値の算出

蛍光測定条件
励起波長 : 485±20 nm
検出波長 : 530±25 nm
検出方向 : プレート底面側(上面側でも可)
測定温度 : 37℃

プレート位置※2
Sample1~10 STD1~4 Blank
サンプル希釈溶液 35 μL - -
STD - 35 μL -
試薬C - - 35 μL
試薬D 115 μL
- プレートシールで蓋をし、プレート庫内に入れる
- 振とう攪拌し、蛍光強度(f 0min)を測定
- 37℃、10 min加温
- マイクロプレートを取り出し、プレートシールを剥がす
試薬E 50 μL
- 50 μL
蛍光強度の経時変化を2分間隔で45回(90分間)測定(f 2min~f 90min)
解析処理

ORAC予測値の算出ではSampleの希釈系列を10倍、50倍、250倍、1,250倍希釈として下さい。 最大10種のサンプルを測定可能です。
サンプルを加えなかったウェルには試薬Cを分注して下さい。

注:試料を分注するプレート位置や試薬の調製方法等に関する詳細は商品添付の取扱説明書にてご確認ください。

※2 各試料を分注するプレート位置は商品添付の取扱説明書に記載されています。

ORAC値の算出(本試験)
1. ORAC予測値を25で除した値を求める
2. サンプル10倍希釈溶液を試薬Cで①の倍率に希釈する(希釈倍率Ⅰ)
3. 2を試薬Cで2倍希釈する。(希釈倍率Ⅱ)
4. 希釈倍率Ⅰ及びⅡを「ORAC予測値の算出」と同様に測定する。

測定例
本製品は、国立研究開発法人農業・食品産業技術総合研究機構により妥当性の確認された測定方法として確立された標準化法による測定と同等の性能をもつことを確認しています。(Fig.1)

【方法】
・各食品の凍結乾燥粉末から高速溶媒抽出装置を用いてMWA(メタノール:水:酢酸=90:9.5:0.5)溶液で抽出した検体をサン プルとして使用3)
・H-ORAC測定用キット及び標準化法に基づく方法で測定した。
・測定は2機関(農研機構食品研究部門及び和光純薬)にて2回並行で実施した。

【測定結果】
・2機関による測定の結果キットを用いた際の測定値は標準化法に基づいた場合の測定値と同等であった。(Table 1, 2)

H-ORAC-03.png

H-ORAC-04.png

注:各試料のH-ORAC値及びデータグラフ等は参考データであり、商品を保証するデータではありません。

【参考文献】
3) Watanabe, J. et al. : J. Food Sci., 79: C1665-C1671(2014).

キット構成

試薬名 容量 数量
フルオレセイン 1 mL用 1
トロロックス 1 mL用 2
APPH 15 mL用 2
フェルラ酸 100 mg 2
Assay Buffer 500 mL用 1
96穴マクロプレート - 2
プレートシール - 4

キット以外に必要な器具・器材
・メタノール(試薬特級など)
・酢酸(試薬特級など)
・プレートリーダー※1
・マイクロピペット
・コニカルチューブ
・恒温槽(37℃)

※1 庫内が37℃に調整可能であり、蛍光強度(励起波長485±20 nm、検出波長530±25 nm)の変化が2分おきに90分間測定可能なもの

製品一覧

H-ORAC測定用キット

品名容量希望納入価格(円)メーカーコード
H-ORAC測定用キット 1 キット 28,000 295-79501

別売りプレート・プレート用シール※5

品名容量希望納入価格(円)メーカーコード
浮遊培養用プレート96F(独立ウェル)フタ付 60 枚 24,000 638-28501
プレートシール 200 枚 13,000 630-27341
※5 プレートおよびプレート用シールはキットに含まれています。追加で使用する場合に上記製品をご活用ください。

TECAN社 推奨プレートリーダー

品名容量希望納入価格(円)メーカーコード
Spark® 1 台 見積り
Infinite® 200PRO 1 台 見積り
※上記製品の吸光波長範囲等の仕様詳細はこちらからご確認ください。
【参考】パンフレット記載の当社データはSpark® を用いた際の測定結果です。
  • ・掲載内容は、2017年4月時点での情報です。法律および最新情報は、メーカーコードをクリックいただきご確認いただけます。
  • ・掲載されている試薬は、試験・研究の目的のみに使用されるものであり、「医薬品」、「食品」、「家庭用品」などとしては使用できません。
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